緣由：
客戶咨詢購買的三鷹抗體放-20℃，購買的Santa抗體卻要放4℃？購買的Biolegend重組蛋白（液體）如何保存，一次性用不完，是否需要分裝，如何分裝？
那抗體應該儲存在什么溫度條件？不同廠家、不同種類的抗體由于性質（固態(tài)、液態(tài)、標記與否）、產(chǎn)品添加劑（甘油、疊氮鈉、牛血清蛋白、明膠）的不同，導致儲存條件也有所差異。具體以廠家說明書為準。
抗體的穩(wěn)定性：
抗體是免疫系統(tǒng)中最重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結構，分子中70% 氨基酸殘基(免疫球蛋白結構域)以beta片層(beta-sheet)形式堆疊，形成緊密并能耐受蛋白酶作用的“三明治"結構，輕鏈和重鏈通過保守的二硫鍵形成具有三個結構域的免疫球蛋白，大大提高了分子本身的穩(wěn)定性。
抗體主要涉及化學或物理不穩(wěn)定性?；瘜W不穩(wěn)定性是指多肽或蛋白質結構內(nèi)共價鍵的形成或破壞。蛋白質化學失活機制主要包括聚合作用、重要氨基酸的變化，如肽鍵在稀酸條件下被水解；半胱氨酸、色氨酸、甲硫氨酸的氧化；二硫鍵的還原；用金屬離子修飾巰基形成硫醇鹽；天冬酰胺與谷氨酰胺的脫酰胺；氨基酸消旋，寡聚蛋白解聚成單體等。而抗體結構的展開、解離、變性、聚集和沉淀被稱為構象或物理不穩(wěn)定性。
眾所周知，儲存條件（pH值、緩沖液類型、穩(wěn)定劑、防腐劑、蛋白酶抑制劑、溫度和反復解凍）在抗體穩(wěn)定性中起著至關重要的作用。
保存溫度：
每種樣品均有其穩(wěn)定的溫度范圍，溫度升高會引起許多物理和化學變化，如溫度升高10℃，氧化反應約加快數(shù)倍，酶促反應約增加1-3倍；又如多數(shù)蛋白在60℃以上開始變性，熱變性通常是不可逆的，不利于物質的穩(wěn)定存在。另外，適宜的溫度(如室溫)又是微生物污染的重要條件。而低溫卻可以抑制氧化、水解等化學反應及微生物生長，使微生物處于生命遲緩和隱蔽狀態(tài)。故大多數(shù)生化樣品選擇低溫保存，其穩(wěn)定性可大大增加。
通常蛋白質短期在4℃中儲存穩(wěn)定，不穩(wěn)定的蛋白質應儲存在-20℃，而極不穩(wěn)定的蛋白質存儲在-70℃。然而在冷凍過程中會產(chǎn)生大量的小冰晶，形成更大的冰-水界面表面積，冰-水表面面積的增加與蛋白質構象的變化和蛋白質聚集的增加有關，因此需要避免反復凍融。
凍干粉抗體，穩(wěn)定性高，可在-20℃、-80℃條件中長時間保存（長達數(shù)年），4℃環(huán)境也較為穩(wěn)定。權衡各種因素，凍干粉抗體一般保存在-20℃，取用方便，保存時間長。粉末狀抗體溶解后即變成液體狀態(tài)抗體，保存條件發(fā)生變化。需要按照說明書或者液體抗體保存方法（最好分裝）。
為什么抗原抗體需要避免反復凍融？
抗原或抗體的保存條件非常重要，只要條件得當，一般都可以保存幾個月到幾年。對于多數(shù)的抗原或者抗體而言，保存在-20℃或者-80℃是最佳的方法。
但是肯尼亞醫(yī)學研究所的Carolyne M. Kifude等在測試抗原rPfHRP2 的穩(wěn)定性中發(fā)現(xiàn)（Carolyne M. Kifude, etal. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Detection of Plasmodium falciparum Histidine-Rich Protein 2 in Blood, Plasma, and Serum，Clinical and Vaccine Immunology, 2008, 15(6): 1012–1018），反復凍融5次后，抗原的回收率開始迅速下降。
原因是冷凍過程中，容器的內(nèi)壁產(chǎn)生的水冰晶體會產(chǎn)生“鹽析”效應，從而使蛋白質和賦形劑越來越集中在容器的較慢冷凍中心。高鹽和/或高蛋白濃度可導致冷凍過程中沉淀和聚集，解凍時不能完全逆轉，從而使蛋白失效。
那么，如何避免反復凍融？
1、將抗體4℃保存，避免反復凍融。
Santa的抗體說明書顯示4℃保存，請勿冷凍，抗體溶液含有0.1%的NaN3防腐。有實驗顯示冷凍后抗體活性反而損失一半以上。
Jackson的抗體說明書也顯示4℃保存，抗體溶液中居然還不含任何防腐劑。
2、將抗體分裝保存在-20℃或者-80℃，每次取一管解凍使用，避免反復凍融。
3、更多廠商的抗體需要保存在-20℃，如何避免反復凍融。
一些研究人員為了防止反復凍融造成的損失，會在抗體中添加冷凍保護劑。許多冷凍保護劑富含羥基，優(yōu)先吸附在蛋白質分子附近，使蛋白質優(yōu)先水合并因此穩(wěn)定。此外，冷凍保護劑可以通過延遲抗體溶液的冰結晶和共晶轉變來減少抗體聚集。因此，冷凍保護劑可用于抑制冷凍/解凍誘導的抗體聚集。
保護劑的實際冰點取決于保護劑的特性和濃度。當儲存溫度低于冷凍保護劑抗體溶液的冰點時，溶液才會凝固。然而，通常會發(fā)生玻璃化（快速冷卻，低溫時形成的一種高黏度的介于液態(tài)和固態(tài)之間、非晶體、透明的玻璃態(tài)），而不是冰晶形成，在玻璃化過程中，溶液固化而不形成晶體，因此抗原或抗體的結構完整性得以保持。
為提高穩(wěn)定性，通常添加甘油至終濃度為 50%，將冰點降低至 -22°C ，此時將抗體保存在-20°C冰箱，不會被冰凍起來，避免了反復凍融。
蛋白質保存濃度：
通常蛋白質的濃度也是影響穩(wěn)定性重要因素，一般蛋白質在高濃度(1 mg/ml或者更高)溶液中比較穩(wěn)定，不容易降解，因為液態(tài)蛋白質容易受水化作用的影響，保存時濃度不能太低，否則可能引起亞基蛋白和輔助因子解離，會導致結構松散，穩(wěn)定性下降而易于失活。
因此部分抗體試劑中加入了牛血清白蛋白（BSA）作為蛋白質穩(wěn)定劑來防止降解。加入BSA能夠抑制冷凍引起的蛋白質去折疊，通過增加蛋白質的起始濃度，能夠增強在凍融過程中蛋白質制備物對損傷的耐受性。當?shù)鞍踪|的起始濃度增高時，抗體變性的百分比也會下降。另一方面，加入的蛋白還能盡可能減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。
當抗體稀釋至工作濃度后，應當及時使用，在4℃盡量不要超過1天。
抗體的分裝：
分裝可以最大限度地減少因反復凍融導致的損失，因為反復凍融會使抗體變性，導致抗體形成聚合物，從而降低抗體的結合能力。分裝還可以最大限度地減少因多次移液引發(fā)的污染。
對于添加50%甘油的抗體，一般不需要分裝。原因是添加50%甘油，冰點降為-22°C，當放在-20℃時保存不會結冰，不存在反復凍融風險；另外，抗體分裝可能會降低抗體效價。由于抗體溶液體積一般都比較小，管壁的吸附作用、水蒸氣的冷凝作用都不容忽視，兩種效應會使得分裝后抗體的有效濃度降低，效價降低。并且，分裝體積越小，效價損失越大。
分裝的量以一次實驗用完為好，但最少每份不能少于 10 µl ，分裝體積越小，儲備液濃度就越容易受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。復融后的分裝抗體一次用不完，需將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來，4℃可以短期保存（一到兩周）。
防止污染：
微生物污染也是造成蛋白質降解的常見因素，為了防止微生物污染，首先要保證在無菌的環(huán)境下進行生產(chǎn)，并將疊氮鈉作為抗菌劑加入抗體溶液中，終濃度為 0.02% (w/v)。其本質是呼吸鏈阻斷劑，和氰化物一樣可以阻斷生物氧化呼吸鏈的最后一步。起到保持抗體活性的同時，還能達到最佳的抑菌效果。
疊氮鈉對大部分生物體有劇毒，能夠阻斷細胞色素電子傳遞系統(tǒng)。故含疊氮鈉的抗體不適用于活細胞和體內(nèi)實驗。同時疊氮鈉會抑制HRP活性，故也不能用于HRP-抗體的防腐。原因是疊氮鈉的（CN-）離子能夠與過氧化酶的鐵離子結合，從而抑制其活性。
疊氮鈉會干擾與氨基有關的結合，所以在抗體結合熒光素前應該進行去除疊氮鈉，或者選擇不含疊氮鈉不含甘油的抗體。
由于疊氮鈉劇毒，屬于管制化學品，因此國內(nèi)抗體廠家不少改成更安全的Proclin 300。
特殊抗體保存條件：
1、酶標抗體，堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶標記的抗體對于冷凍特別敏感，一般在4℃短期存儲，長期保存最好是在終濃度為50％的甘油中于-20℃保存。雖然某些酶可在無保護劑的情況下于-20℃儲存，但必須分裝，反復凍融會降低酶活力或促進抗體聚集，影響抗體結合能力。
2、流式抗體（熒光素標記抗體），流式抗體由于標記物為熒光素（FITC、PE、APC等），對光十分敏感，需要避光保存。此外，熒光素特別是蛋白類熒光素，熒光基團是嵌在蛋白結構內(nèi)部，冷凍會破壞蛋白的結構，從而影響熒光效率；而化學熒光基團在反復凍融之后也會淬滅，故一般采用不加甘油4℃避光保存。
抗體為什么要4℃運輸？
一般抗體快遞運輸需要2-3天左右，所以需要在低溫條件下來完成的。低溫運輸一般分為冰袋和干冰兩種，由于大多數(shù)抗體都是4℃或-20℃保存，而干冰溫度能達到-78.5℃，如果使用干冰運輸，那么抗體將被冰凍，收到抗體保存時，按照說明書放4℃或者-20℃，抗體就多了一次凍融過程，所以運輸過程中一般避免干冰運輸，而選擇4℃運輸，最主要的目的是為了避免反復凍融影響抗體的活性。
